如何在安捷伦Seahorse XF HS迷你板中接种贴壁细胞

设计Seahorse XF HS迷你板的目的是每孔可使用更少细胞进行XF分析，以便对非增殖细胞或数量有限的细胞进行功能分析。孔的接种面积为0.031cm²，约为标准XFp（或XFe96）细胞培养板接种面积的30%。

XF HS迷你板为一块8孔细胞培养板，每个孔的中心有一个凸起的“环状”元件(图1A)。XF HS迷你板经过组织培养处理和γ射线照射。每块XF HS迷你板均预装有硅胶细胞接种遮罩和板盖。每包还配有一个遮罩拆卸工具(图1B)。本文将介绍在安捷伦XF HS迷你板中接种贴壁细胞的流程。

图1. (A) XF HS迷你板的环状元件圈出了更小的细胞接种区域。(B) 每个板均预装有硅胶细胞接种遮罩、XF HS 迷你板板盖，以及可重复使用的遮罩拆卸工具。

接种细胞

1.取出XF HS迷你板，揭下密封箔，待用；

2.在细胞培养孔周围的水槽中加入无菌水或PBS(图2)；

a.将8通道移液器设为200 µL，填充水槽两侧(每个水槽容纳两个吸头)；

b.如果没有多通道移液器，向每个水槽中加入400µL无菌水或PBS(共3200µL)。

图2.使用8通道移液器将溶液加入板孔两侧的水槽中。

3.确定预期接种浓度。最佳细胞接种数量可能差别很大，但通常为每孔1.0 × 10³ 到1.0 × 10⁴个细胞。请参阅安捷伦细胞分析出版物数据库，根据细胞类型查找细胞接种密度建议。XF HS迷你板通常可容纳XFe96或XFp细胞培养板所需细胞数量的三分之一；

4.采用标准流程收集细胞，将细胞重悬于适当生长培养基中，计数，然后稀释至所需的接种浓度；

示例：收集和计数完成后，细胞浓度为7.5 ×10⁵个细胞/mL。为达到预期接种浓度，稀释倍数为7.5 ×10⁵个细胞/mL/1.0 × 10⁵个细胞/mL = 7.5。对于一块 XF HS板，将100 µL细胞与650 µL生长培养基混合。

5.向孔B至孔G内的环状元件中加入30 µL细胞悬液，轻轻但平稳地按下推杆，将细胞悬液排出至单个XF HS迷你板孔中；

a.建议将20–200 µL(或更小规格)移液吸头与硅胶遮罩配套使用；

b.建议在XF HS 迷你板中一次接种一个孔的细胞，移液吸头必须伸入孔底部以确保正确排液(图3)。

图 3. 将移液吸头(蓝色轮廓)插入每个孔底部，排出细胞悬液。

6. 向A孔和H孔中加入30 µL生长培养基(不含细胞)，作为背景校正孔；

注：如果孔底形成气泡(图4)，可将板以200× g离心1–2分钟来去除气泡。

图4. (A)(离心前)标出的孔底部有一个气泡，(B)(离心后)气泡在离心过程中排出。

重要信息：在室温下将板在超净工作台中放置一小时，对于某些细胞类型，这一过程可以促进细胞分布。

7.用显微镜监测贴壁情况；

8.在室温下放置一小时后，将细胞置于细胞培养箱中过夜生长。

注：XF HS迷你板与Agilent XFp迷你板托盘(部件号103057-100)兼容。

声明：仅供研究使用，不用于诊断性操作。

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