安捷伦Seahorse XF实验检测液解决方案

安捷伦Seahorse细胞能量代谢分析系统采用独特的XF技术实时、同时测量活细胞内两条主要的能量代谢途径——线粒体呼吸和糖酵解，极大地简化了细胞能量代谢过程。安捷伦Seahorse XF培养基专用于XF分析，推荐研究者使用，以获得最佳实验结果。

用 pH 7.4 的XF DMEM或RPMI培养基制备安捷伦Seahorse XF实验用培养基的最佳实践方案：

1. 在使用当天将足量pH 7.4的XF DMEM或RPMI培养基转移至一个新的无菌瓶中。

注：如果当天实验只需少量培养基，建议不要预热整瓶，且每次使用过后拧紧瓶盖以保持pH值不变；

2. 加入适量XF补充剂/底物；

注：必须在推荐的浓度范围内使用XF补充剂，以确保分析培养基具有准确的最终pH值。如果使用其他供应商提供的其他品牌的补充剂，则无法保证培养基具有准确的 pH值。推荐的补充剂浓度为葡萄糖0-10 mmol/L、丙酮酸盐0-1 mmol/L、谷氨酰胺0-2 mmol/L。特定补充剂浓度取决于不同实验需求。参见XF分析培养基的制备流程和XF分析试剂盒用户指南了解详细信息。如果培养基和所有补充剂的无菌状态未受到破坏，则不需要对最终分析培养基进行过滤除菌。

3. 将培养基预热到37 ºC，分析培养基即可用于分析（无需调节 pH）。

用需要调节 pH 的培养基制备安捷伦 Seahorse XF 分析培养基的最佳实践方案：

1. 在使用当天将足量 XF 培养基转移至一个新瓶中；

2. 加入适量补充剂/底物；

注：制备用于糖酵解速率测定的分析培养基时，需要在DMEM培养基和RPMI培养基中分别加入5 mmol/L和1 mmol/L 的HEPES 缓冲液。而对其他XF分析的培养基，可以不加 HEPES。

3. 将培养基预热到 37 ºC；

4. 将pH调至7.4 ± 0.1；

5. 调节pH值后对培养基进行过滤灭菌，分析培养基即可用于分析。

常见问题：

1.Seahorse XF检测液中需要加入抗生素吗？

无需加入抗生素，因为大部分XF实验在几小时内就结束了。

2.可以在Seahorse检测液中加入血清吗？

不建议加入血清（如：FBS），因为其会影响检测液的缓冲能力，并可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果。另外，使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药孔中进行注射时，会出现注射失败的情况。

3.加入底物的检测液在多长时间内可保持稳定？或可以提前配好检测液吗？

Seahorse检测液在实验当天现用现配。

4.为何使用自购的glucose、pyruvate和glutamine与Seahorse XF base medium 配制检测液时，调节pH时要加很多NaOH，且pH变化非常慢？

可能是由于glucose、pyruvate和glutamine 中存在一些杂质，比如缓冲成分，导致加入NaOH后pH变化较慢。

5.为何不能使用XF base medium配制的检测液进行Glycolytic rate与real-time ATP rate两个实验？

XF base medium中含有酚红，该物质会影响这两个实验的测量。

6.为何不能使用GlutaMAX来代替Glutamine呢？

不建议使用GlutaMAX来配制检测液。因加入GlutaMAX后，还需细胞进一步将其转化为Glutamine，这可能会影响线粒体对Glutamine氧化的动力学过程。

7.检测液的pH对XF实验非常重要吗？

是的，Seahorse XF实验通过测定细胞代谢物（如：氧和质子）的变化来确定OCR 和ECAR，而检测液pH会影响这些代谢物的产生或消耗，因此保持检测液一致的 pH（37℃，pH=7.4）非常重要。

声明：仅供研究使用，不用于诊断性操作。

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